فروشگاه

توضیحات

پایان نامه ارزیابی میزان تولید داروی دسفرال از سویه استرپتومایسس پیلوسوس به روش بیولوژیک

چکیده 

دسفری اکسامینB،‌ تنها سیدروفوری است که فرم مزتیله آن (نمک متان سولفونات دسفری اکسامین B) با نام تجاری دسفرال جهت درمان بیماران تالاسمی، به منظور شلاته کردن بار اضافی آهن، استفاده می گردد.

به همین منظور جهت تولید دسفری اکسامین B، از سویه استرپتومایسس پیلوسوس استفاده گردید و سویه مربوطه در محیط کشت Soy bean کشت داده شد و دسفری اکسامین آن بوسیله استفاده از محلول فنل- کلروفرم و اتر استخراج گردید. به منظور طراحی این سیستم بیولوژیکی و افزایش بهره برداری از محصول مذکور از منابع کربن و نیتروژن مختلف استفاده گردید و تاثیر هر یک بر میزان دسفری اکسامین تولیدی بررسی شد. چنانچه مشاهده گردید که اسید آمینه ترئونین، افزایش قابل ملاحظه ای بر دسفری اکسامین تولیدی از سویه مذکور دارد و مقدار %۱۲۵/۰ ترئونین، در محیط کشت Soy bean، بسیار مطلوب می باشد. از طرفی اثر ویتامین تیامین (B1)بررسی گردید و مشاهده شد که تاثیر مثبت بر دسفر اکسامین تولیدی دارد و در رده بعد از اسید آمینه ترئونین قرار می گیرد. همچنین اثر اسید آمینه لوسین نیز بر تولید دسفری اکسامین مثبت بوده و در رده بعد از ویتامین تیامین (B1) قرار می گیرد.

در ایـن تحقـیق از شلاته کننـده های کاتیونی EDTA، ۸-hydroxyquinoline  در محـیط کشت Soy bean استفاده شد و مشاهده گردید که شلاته کننده های مذکور اثر منفی بر تولید دسفری اکسامین  دارند در نتیجه، کاتیونها، اثر مثبت بر افزایش میزان دسفری اکسامین تولیدی خواهند داشت به همین منظور مواد معدنی مختلف از جمله اثر

CaCl2.2H2O,MgSO4.7H2O,ZnSO4.7H2O, MnCl2, FeSO4.7H2O

و همچنین  اثرCaCl2.2H2O,MgSO4.7H2O به طور همزمان در محیط کشت Soy bean بررسی گردید.

در این تحقیق نتایج مطلوبی بدست آمد، بطوری که کلسیم (بصورت CaCl2.2H2O) اثر قابل ملاحظه‌ای بر افزایش میزان دسفری اکسامین تولیدی از سویه مذکور دارد و مقدار ۸/۲، و ۲، CaCl2.2H2O سبب افزایش قابل توجهی بر میزان محصول مذکور می گردد. و بدین ترتیب تاثیر مثبت کلسیم، بر تولید دسفری اکسامین مشخص گردید.

در این آزمایشات تاثیر مثبت روی، منیزیم و منگنز بر دسفری اکسامین تولیدی آشکار گردید بطوری که غلظت  2-10 × 4/0، ZnSO4.7H2O و  6/0، MgSO4.7H2O و  2، MnCl2 سبب افزایش تولید دسفری اکسامین شد.

از طرفی استفاده همزمان CaCl2.2H2O,MgSO4.7H2O در محیط کشت Soy bean اثر منفی بر تولید دسفری اکسامین را نشان داد.

همچنین بررسی ها در مورد آهن (بصورت FeSO4.7H2O)‌ نشان داد که افزایش غلظت آهن، سبب کاهش میزان دسفری اکسامین تولیدی گردید.

و اینگونه با استفاده از منابع نیتروژن و مواد معدنی مختلف بهینه سازی محیط کشت انجام گرفت و تولید دسفری اکسامین از سویه استرپتومایسس پیلوسوس به میزان قابل ملاحظه ای افزایش یافت.

در این تحقیق، پروتئاز تولیدی از سویه استرپتومایسس پیلوسوس نیز بوسیله روش لوری (Lowry) اندازه گیری شد و اثر روی بصورت ZnSO4.7H2Oو آهن بصورت FeSO4.7H2O نیز بررسی گردید و مشاهده شد که افزایش غلظت روی، سبب افزایش پروتئاز تولیدی، از سویه مذکور گردید.

 

  167 صفحه فایل ورد (Word) فونت ۱۴ منابع دارد  قیمت ۵۵۰۰ تومان

 

پس از پرداخت آنلاین میتوانید فایل کامل این پروژه را دانلود کنید

 

 

فهرست مطالب

 

عنوان                                                                                                               صفحه

چکیده…………………………………………………………………………………………………………………………. ۱

مقدمه………………………………………………………………………………………………………………………….. ۳

فصل اول

۱-۱ – تالاسمی……………………………………………………………………………………………………………… ۸

۱-۲-اتیولوژی و سبب شناسی تالاسمی……………………………………………………………………………….. ۸

۱-۲-۱ – خون شناسی…………………………………………………………………………………………………….. ۹

۱-۲-۲- خون سازی و گلبولهای قرمز……………………………………………………………………………….. ۱۰

۱-۳- تالاسمی و انواع آن………………………………………………………………………………………………. ۱۰

۱-۳-۱ آلفا تالاسمی……………………………………………………………………………………………………… ۱۰

۱-۳-۲- بتا تالاسمی……………………………………………………………………………………………………… ۱۱

۱-۳-۲-۱ بتا تالاسمی مینور(سالم ناقل)……………………………………………………………………………… ۱۱

۱-۳-۲-۲ – بتا تالاسمی ماژور( بیماری تالاسمی)………………………………………………………………… ۱۲

۱-۳-۲-۳-بتا تالاسمی بینابینی…………………………………………………………………………………………. ۱۳

۱-۴- تشخیص تالاسمی………………………………………………………………………………………………… ۱۳

۱-۵- درمان تالاسمی…………………………………………………………………………………………………….. ۱۳

۱-۶- فیزیولوژی عنصر آهن و اهمیت آن در بدن انسان…………………………………………………………. ۱۴

۱-۶-۱- مسمومیت حاد آهنی………………………………………………………………………………………….. ۱۵

۱-۷- دسفرال……………………………………………………………………………………………………………… ۱۶

۱-۷-۱- نحوه استفاده از داروی دسفرال…………………………………………………………………………….. ۱۷

۱-۷-۲-کاربردهای داروی دسفرال در پزشکی…………………………………………………………………….. ۱۸

۱-۷-۳- عوارض ناشی از داروی دسفرال…………………………………………………………………………… ۱۹

۱-۷-۴- اقدامات احتیاطی در مورد داروی دسفرال……………………………………………………………….. ۱۹

۱-۷-۵- ملاک توقف درمان بوسیله دسفرال………………………………………………………………………… ۲۰

 

فصل دوم

۲-۱-  سیدرو فورها……………………………………………………………………………………………………… ۲۲

۲-۱-۱- هیدروکسامات ها……………………………………………………………………………………………… ۲۴

۲-۱-۲-فنولات ها یا کاتکولات ها……………………………………………………………………………………. ۲۵

۲-۲- دسفری اکسامین ها………………………………………………………………………………………………. ۲۶

۲- ۲-۱ – ساختمان دسفری اکسامین………………………………………………………………………………… ۲۸

۲-۲-۲- دسفراکسامین بصورت آنتی اکسیدان……………………………………………………………………… ۲۸

۲-۲-۳ – خصوصیات فیزیکو و شیمیایی دسفراکسامین…………………………………………………………. ۲۹

۲-۲-۴- مکانیسم دسفراکسامین در جلوگیری از بیماریهای با بار اضافی آهن………………………………. ۲۹

۲-۲-۵- تشکیل رادیکال  DFO nitroxide…………………………………………………………………….. 30

۲-۳-  دسفری اکسامین B……………………………………………………………………………………………… 31

۲-۳-۱- بیوسنتر دسفری اکسامین B…………………………………………………………………………………. 33

۲-۳-۲- ژنهای کد کننده دسفری اکسامین B………………………………………………………………………. 33

۲-۴- تولید کننده­های دسفری اکسامین………………………………………………………………………………. ۳۴

۲-۵- اهمیت آهن بر روی میکروارگانیسمها……………………………………………………………………….. ۳۵

۲-۶- مکانیسم عمل سیدروفورها در ارتباط با انتقال آهن به درون سلول میکروارگانیسمها………………. ۳۶

۲-۷- تولید، استخراج و تخلیص دسفری اکسامین B…………………………………………………………….. 37

فصل سوم

۳-۱- اکتینومیست ها…………………………………………………………………………………………………….. ۴۰

۳-۲- استرپتومایسس ها…………………………………………………………………………………………………. ۴۳

۳-۲-۱- پاتولوژی………………………………………………………………………………………………………… ۴۳

۳-۲-۲ – مرفولوژی و ساختمان………………………………………………………………………………………. ۴۳

۳-۲-۳- مشخصات کلنی……………………………………………………………………………………………… ۴۵۴

۳-۲-۴- اسپورزایی……………………………………………………………………………………………………….. ۴۷

۳-۲-۵- ترکیبات پوشش سلولی………………………………………………………………………………………. ۴۹

۳-۲-۶- تغذیه و فاکتورهای موثر بر رشد و خصوصیات فیزیکوشیمیایی…………………………………….. ۴۹

۳-۲-۶-۱- تغذیه…………………………………………………………………………………………………………. ۴۹

۳-۲-۶-۲- اکسیژن……………………………………………………………………………………………………….. ۵۰

 

۳-۲-۶-۳ – رطوبت……………………………………………………………………………………………………… ۵۰

۳-۲-۶-۴- دما…………………………………………………………………………………………………………….. ۵۱

۳-۲-۶-۵- pH…………………………………………………………………………………………………………… 51

۳-۲-۶-۶- اکولوژی……………………………………………………………………………………………………… ۵۲

۳-۲-۶-۷- بیولوژی توسعه یافته استرپتومایسس…………………………………………………………………… ۵۳

۳-۲-۷- انواع فرآورده های میکروبی………………………………………………………………………………… ۵۶

۳-۲-۷-۱- متابولیت های اولیه………………………………………………………………………………………… ۵۶

۳-۲-۷-۲- متابولیت های ثانویه……………………………………………………………………………………….. ۵۶

۳-۲-۷-۲-۱- آنتی بیوتیک ها…………………………………………………………………………………………. ۵۸

۳-۲-۷-۲-۱-۱- فیزیولوژی و تنظیم تولید آنتی بیوتیک…………………………………………………………. ۵۸

۳-۲-۷-۳- آنزیمها……………………………………………………………………………………………………….. ۶۳

۳-۲-۷-۳-۱- پروتئازها…………………………………………………………………………………………………. ۶۳

۳-۲-۷-۳-۱-۱- پروتئازهای اسیدی…………………………………………………………………………………. ۶۷

۳-۲-۷-۳-۱-۱-۱- رنین……………………………………………………………………………………………….. ۶۷

۳-۲-۷-۳-۱-۲- پروتئازهای خنثی…………………………………………………………………………………… ۶۷

۳-۲-۷-۳-۱-۳- پروتئاز های قلیایی…………………………………………………………………………………. ۶۷

۳-۲-۷-۳-۱-۳-۱- فرآیند تخمیر پروتئازهای قلیایی…………………………………………………………….. ۶۸

۳-۲-۷-۳-۱-۳-۲- تعیین فعالیت پروتئاز قلیایی………………………………………………………………….. ۶۹

۳-۲-۷-۳-۱-۴- بازدارنده های فعالیت آنزیم پروتئاز وشلاته کننده ها……………………………………….. ۶۹

۳-۲-۷-۳-۱-۵- تجزیه…………………………………………………………………………………………………. ۷۱

۳-۲-۷-۳-۱-۶- پروتئاز ها و استرپتومایسسها…………………………………………………………………….. ۷۱

۳-۲-۸- محیط کشت  تخمیر صنعتی………………………………………………………………………………… ۷۱

۳-۲-۸-۱- نیازهای غذایی میکروارگانیسم‌ها……………………………………………………………………….. ۷۱

۳-۲-۸-۱-۱- کربن………………………………………………………………………………………………………. ۷۴

۳-۲-۸-۱-۱-۱- منابع کربن و استرپتومایسس ها…………………………………………………………………. ۷۷

۳-۲-۸-۱-۲-نیتروژن……………………………………………………………………………………………………. ۷۸

۳-۲-۸-۱-۲-۱-  منابع نیتروژن و استرپتومایسس ها…………………………………………………………….. ۸۰

۳-۲-۸-۱-۳- هیدروژن و اکسیژن……………………………………………………………………………………. ۸۰

 

۳-۲-۸-۱-۴- مواد معدنی………………………………………………………………………………………………. ۸۰

۳-۲-۸-۲-تنظیم کننده های متابولیکی………………………………………………………………………………… ۸۱

۳-۲-۸-۳- ضد کف ها…………………………………………………………………………………………………. ۸۲

۳-۲-۹- بیوسنتز  در استرپتومایسس ها………………………………………………………………………………. ۸۳

فصل چهارم

۴-۱- دستگاه های مورد استفاده……………………………………………………………………………………….. ۸۶

۴-۲- وسایل مورد استفاده………………………………………………………………………………………………. ۸۶

۴-۳ – محیط های کشت مایع برای رشد باکتری………………………………………………………………….. ۸۸

۴-۴- محیط های کشت جامد برای رشد باکتری………………………………………………………………….. ۸۹

۴-۵- محیط های جامد برای تولید اسپور……………………………………………………………………………. ۸۹

۴-۶- مواد لازم جهت رنگ آمیزی گرم……………………………………………………………………………… ۹۰

۴-۷- مواد لازم جهت استفاده از میکروسکوپ نوری…………………………………………………………….. ۹۱

۴-۸- محیط مورد استفاده جهت شناسایی کیفی دسفری اکسامین: محیط Des4……………………………. 91

۴-۹- محیط مورد استفاده جهت اندازه گیری تولید دسفری اکسامین محیط Soy bean ………………. 91

۴-۱۰- مواد لازم جهت نگهداری و ذخیره باکتری ها…………………………………………………………….. ۹۲

۴-۱۱- معرف های دسفری اکسامین…………………………………………………………………………………. ۹۲

۴-۱۲- مواد لازم جهت رسم منحنی استاندارد دسفری اکسامین B……………………………………………. 92

۴-۱۳- مواد لازم جهت استخراج دسفری اکسامین………………………………………………………………… ۹۲

۴-۱۴- مواد لازم جهت تهیه محلول Lysing Buffer…………………………………………………………. 93

۴-۱۴-۱ – مواد لازم جهت تهیه محلول Tris Hcl……………………………………………………………… 93

۴-۱۵- محلول کازئین %۵/۰ دربافر فسفات…………………………………………………………………………. ۹۳

۴-۱۵-۱- بافر فسفات (PBS)……………………………………………………………………………………….. 93

۴-۱۶- محلول لوری (Lowry)……………………………………………………………………………………… 93

فصل پنجم

۵ – ١- تهیه و آماده سازی سویه استرپتومایسس پیلوسوس…………………………………………………….. ۹۸

۵ ـ ٢ ـ بررسی خصوصیات مرفولوژیکی سویه استرپتومایسس پیلوسوس……………………………………. ۹۸

۵-٢-١- خصوصیات ماکروسکوپی…………………………………………………………………………………… ۹۹

۵- ٢-١-١- کشت استرپتومایسس پیلوسوس بر روی محیط جامد……………………………………………. ۹۹

 

۵-٢-١-٢- کشت استرپتومایسس پیلوسوس در محیط مایع…………………………………………………….. ۹۹

۵-٢-٢ خصوصیات میکروسکوپی…………………………………………………………………………………….. ۹۹

۵-٢-٢-١- تهیه لام از محیط کشت جامد…………………………………………………………………………… ۹۹

۵-٢-٢-٢- تهیه لام از محیط کشت مایع………………………………………………………………………….. ۱۰۰

۵ـ ٢ـ٢ـ ٣ـ رنگ آمیزی گرم…………………………………………………………………………………………. ۱۰۰

۵ ـ ٣ـ تهیه مایع تلقیح…………………………………………………………………………………………………. ۱۰۰

۵ ـ ٣ـ ١ـ تهیه محیط ذخیره………………………………………………………………………………………….. ۱۰۱

۵ ـ ٣ـ ٢ـ تهیه سوسپانسیون اسپور………………………………………………………………………………….. ۱۰۱

۵ـ ۴ـ رسم منحنی رشد استرپتومایسس پیلوسوس……………………………………………………………….. ۱۰۱

۵ـ ۵ـ بررسی تغییرات  pH در محیط کشت Soybean…………………………………………………….. 102

۵ـ ۶ـ تولید دسفری اکسامین توسط استرپتومایسس پیلوسوس……………………………………………….. ۱۰۲

۵ـ ۶ـ ١ـ تشخیص کیفی دسفری اکسامین………………………………………………………………………… ۱۰۲

۵ـ ۶ـ ٢ـ سنجش میزان تولید دسفری اکسامین در هر روز…………………………………………………….. ۱۰۳

۵-۶-۳- رسم منحنی استاندارد دسفرال…………………………………………………………………………….. ۱۰۳

۵-٧ـ استخراج دسفری اکسامین بوسیله فنل-کلروفرم………………………………………………………….. ۱۰۴

 5 ـ ٧ـ ١ـ مزتیله کردن دسفری اکسامین………………………………………………………………………….. ۱۰۵

۵-۸- تعیین وجود دسفری اکسامین B در ماده استخراج شده………………………………………………… ۱۰۵

۵ـ ٩ـ  بهینه سازی محیط کشت تولید دسفری اکسامین………………………………………………………… ۱۰۷

۵ـ ٩ـ ١ـ بررسی اثر اسید آمینه ترئونین بر تولید دسفری اکسامین……………………………………………. ۱۰۷

۵ ـ ٩ـ ١ـ ١ـ بررسی اثر اسید آمینه ترئونین بر تولید دسفری اکسامین در یک محدوده غلظت………… ۱۰۷

۵ـ ٩ـ ٢ـ بررسی اثر اسیدآمینه ترئونین و اسید آمینه لوسین و ویتامین تیامینB1)  ( برتولید دسفری اکسامین ۱۰۸

۵ ـ ٩ـ ٣ـ بررسی گلوکز و ملاس و سوکروز بر تولید دسفری اکسامین……………………………………. ۱۰۸

۵ـ ٩ـ ۴ـ بررسی اثر شلاته کننده های کاتیون بر تولید دسفری اکسامین…………………………………….. ۱۰۸

۵ ـ ٩ـ ۵ـ  استفاده از محیط کشت عصاره مخمر به جای استفاده از محیط کشت Soybean……….. 109

۵ ـ ٩ـ ۶ـ بررسی اثر مواد معدنی مختلف بر میزان تولید دسفری اکسامین…………………………………. ۱۰۹

۵ ـ٩ـ۶ـ١ـ بررسی تاثیر مواد معدنی در غلظت های مختلف بر میزان تولید دسفری اکسامین………….. ۱۱۱

 

۵ ـ ١٠ – بررسی پروتئاز تولیدی از استرپتومایسس پیلوسوس در حضور شلاته  کننده ها و مواد معدنی مختلف        112

۵ ـ ١٠ـ ١ـ کشت باکتری و سنجش پروتئاز……………………………………………………………………… ۱۱۲

۵ ـ ١٠ـ ۲ـ تخلیص کازئین…………………………………………………………………………………………… ۱۱۳

فصل ششم

۶ـ ١ـ بررسی خصوصیات مرفولوژیکی ماکروسکوپی استرپتومایسس پیلوسوس………………………….. ۱۱۵

۶ـ ١ـ ١­ـ خصوصیات ماکروسکوپی سویه استاندارد بر روی محیط کشت جامد………………………….. ۱۱۵

۶ ـ ١ـ٢ـ خصوصیات ماکروسکوپی سویه استاندارد در محیط کشت مایع…………………………………. ۱۱۵

۶ ـ ٢ـ بررسی خصوصیات مرفولوژیکی میکروسکوپی استرپتومایسس پیلوسوس………………………… ۱۱۶

۶ ـ٣ـ رسم منحنی رشد استرپتوماسیس پیلوسوس در محیط کشت MYB……………………………….. 116

۶-۴- رسم منحنی pH بر حسب زمان در محیط کشت Soybean حاوی سویه استرپتومایسس پیلوسس…. ۱۱۸

۶ ـ ۵ـ تشخیص کیفی و کمی دسفری اکسامین تولیدی………………………………………………………… ۱۲۰

۶-۵-۱- تشخیص کیفی و تولید و یا عدم تولید دسفری اکسامین……………………………………………. ۱۲۰

۶ـ۵ـ۲ـ رسم نمودار استاندارد دسفرال……………………………………………………………………………… ۱۲۰

۶ـ۵ـ۳ـ میزان دسفری اکسامین تولیدی در هر روز توسط سویه استرپتومایسس پیلوسوس در محیط Soy bean……………………………………………………………………………………………………………………………… 121

۶-۶- نتایج مربوط به استخراج دسفری اکسامین تولید شده توسط سویه استرپتومایسس پیلوسوس…… ۱۲۲

۶-۶-۱- نتایج مربوط به تأیید وجود دسفری اکسامین B در ماده استخراج شده………………………….. ۱۲۲

۶-۷-  بهینه سازی محیط کشت تولید دسفری اکسامین………………………………………………………… ۱۲۴

۶-۷-۱  بررسی اثر اسید آمینه ترئونین بر تولید دسفری اکسامین……………………………………………… ۱۲۴

۶-۷-۱-۱- بررسی اثر اسید آمینه ترئونین بر تولید دسفری اکسامین در یک محدوده غلظت…………… ۱۲۴

۶ـ۷ـ ٢ـ بررسی اثر اسید آمینه های ترئونین و لوسین و ویتامین تیامین (B1 )……………………………. 126

۶ ـ ۷ـ٣ـ بررسی گلوکز ، ملاس، سوکروز بر تولید دسفری اکسامین………………………………………… ۱۲۶

۶ـ ۷ـ ۴ـ بررسی اثر شلاته کننده های کاتیون بر میزان تولید دسفری اکسامین…………………………….. ۱۲۷

۶ـ ۷ـ ۵ـ استفاده از محیط کشت عصاره مخمر به جای استفاده از محیط کشت Soybean………….. 128

۶ ـ ۷ـ ۶ـ بررسی اثر مواد معدنی مختلف بر میزان تولید دسفری اکسامین…………………………………. ۱۲۸

۶ – 7 – 6 – 1 – بررسی اثر مواد مختلف با غلظت متفاوت بر میزان تولید دسفری اکسامین ……….. ۱۳۰

 

۶ـ۸ـ بررسی پروتئاز تولیدی از استرپتومایسس پیلوسوس در حضور شلاته‌کننده و مواد معدنی مختلف ۱۳۹

فصل هفتم

– بحث و نتیجه گیری………………………………………………………………………………………………….. ۱۴۳

– پیشنهادات……………………………………………………………………………………………………………… ۱۴۷

– فهرست منابع………………………………………………………………………………………………………….. ۱۴۹

 

 

امروزه عرصه ای از حیات بشری را نمی توان یافت که تأثیر مثبت از بیوتکنولوژی نداشته باشد. کلمه بیوتکنولوژی که از دو بخش بیو (به معنی زندگی و موجودات زنده) و تکنولوژی (به معنای هنر بشر در استفاده از علم) تشکیل شده است [۱۰] بطور کلی بیوتکنولوژی به مفهوم استفاده از موجودات زنده، اندام ها و سلولهای آنها برای تولید یک فرآورده با خدمات با ارزش اقتصادی به منظور بهبودرفاه بشر می باشد. [۱۰] بعبارت دیگر بیوتکنولوژی دانشی است که در رابطه با استفاده از موجودات و متابولیتهای آنها جهت تولید فرآورده های مختلف دارویی، غذایی، شیمیایی و غیره در مقیاس صنعتی بحث می کند. [۱۴]

سرآغاز بیوتکنولوژی به ده هزار سال پیش برمی گردد. [۱۰] روند تکاملی بیوتکنولوژی در طی هزاران سال شکل گرفته است، ولی بیوتکنولوژی مدرن در اواسط دهه ۷۰ متولد شد. [۱۴] از همان آغاز، بیوتکنولوژی در قالب مهندسی شیمی توسعه یافت، از این رو با توسعه ی فرآیندهای صنعتی، گستردگی بیشتری پیدا کرد. [۱۴) بیوتکنولوژی از تکنیکهای مختلف ژنتیک، میکروبیولوژی کاربردی، شیمی، بیو شیمی، بیو لوژی، مهندسی فرآیند و غیره تشکیل می‌شود.[۱۴]

ابزار توانمند بیوتکنولوژی در پزشکی، کشاورزی، حفاظت از محیط زیست انقلاب عظیمی را بوجود آورد و امیدی برای حل بسیاری از مشکلات حاد بشر در سده بیست و یکم است. [۱۰]

بیوتکنولوژی علمی است که بهترین راه برای یافتن علت بیماری ها و درمان آنها مورد استفاده قرار می‌گیرد بطوری که در زمینه بهداشت تحولی عظیم ایجاد کرده است. [۱۰] انتقال وبیان ژنهای موجودات زنده و نوترکیبی آنها در آزمایشگاه به تولید محصولاتی که در پیشگیری و تشخیص و درمان بیماری ها کاربرد دارند از مهمترین عرصه های بکارگیری این دانش در توسعه ارتقاء سلامت و بهداشت جامعه و کنترل بیماری های عفونی و غیر عفونی می باشد. تشخیص دقیق و سریعتر بیماریها از جمله ناهنجاریهای ژنتیک و غربالگری از آنها، تشخیص پیش از تولد،استفاده از سلولهای بنیادین و سلولهای پایه و جنینی در مطالعات پایه و کاربردی پزشکی، تولید داروهای نوترکیب، تشخیص هویت، xenotransplantation  با استفاده از حیوانات برای تولید بافت و اندام های مورد نیاز انسان، ژن درمانی و درمان بسیاری از بیماریهای صعب العلاج و تولید پروبیوتیک ها، بهبود کیفیت مواد غذایی و از همه مهم تر درک فرآیندهای زیستی عوامل بیماری زا، مکانیزم عمل آنها و تدبیر راهبردهای جدید بهداشت و درمان، تنها تعدادی از کارهای بیوتکنولوژی در عرصه بهداشت و پزشکی است.

 

و چه زیبا خداوند متعال، این علم را در سوره علق به انسان آموخته است.

بسم الله الرَّحمنِ الرَّحیم

اِقْرَاْ  بِاسْمِ رَبِّک الَّذی خَلَقْ [۱] خَلَقَ اِلْأنْسانَ مِنْ عَلَقٍ [۲] اِقْرَاْ و رَبُّکَ اَلْاَکْرَمُ [۳]

اَلَّذی عَلَّمَ بِالْقَلَمِ [۴] عَلَّمَ الْأنسانَ مالَمْ یَعْلَمْ [۵]

ای رسول گرامی قرآن را به نام پروردگارت که خدای آفریننده عالم است بر خلق قرائت کن [۱] آن خدائی که آدمی را از خون بسته بیافرید [۲] بخوان قرآن را و پروردگارت کریمترین کریمان عالم است [۳] آن خدایی که بشر را علم نوشتن بقلم آموخت [۴] و به آدم آنچه را که نمی دانست به الهام خود تعلیم داد[۵]

این کلام الهی در کمال ایجاز و اختصار اشاره به تمامی علوم از جمله بیوتکنولوژی دارد، چنانچه در آیه دوم سوره علق، علق (خون بسته) بیانگر سلولهای بنیادی می باشد و خدا در آیه عَلَّمَ الْأِنسانَ مالَمْ یَعْلَمْ ( و به آدم آنچه را که نمی دانست به الهام خود تعلیم داد) بیان داشته است که در کلام قرآن علوم مختلف به انسان الهام و تعلیم داده شده است و همانطور که خداوند بارها تاکید بر تفکر و تعقل در قرآن فرموده است می توان با استعانت از آیات الهی بر بسیاری از علوم فائق آمد.

یقیناً افق روشنتر، در گرو استفاده از ارگانیسمهایی است که بطور ژنتیکی برای تولید فراورده های غیر میکروبی مانند انسولین، اینترفرون، هورمون رشد انسان، واکسنهای ویروسی مهندسی شده اند. [۱۴] چنانچه به تازگی داروی نوترکیب انسانی (Human recombinent)  اینترفرون به دست توانای دانشمندان ایرانی ساخته شد و ایران سومین کشور بعد از آمریکا و آلمان در تولید این فرآورده بیوتکنولوژی می‌باشد.

پس از تولید انسولین انسانی برای درمان دیابت، بیوتکنولوژی همچنان به خلق داروهای جدید و واکسن ها ادامه داده است. این داروها به میلیونها انسانی که در سرتاسر جهان به بیماریهای قلبی، سرطان، دیابت، پارکینسون، آلزایمر، ایدزو…. مبتلا هستند، کمک کرده اند. [۱۰]

طی سالهای ۱۹۲۵ تا ۱۹۶۵ استفاده از میکروبها در صنایع دارویی بصورت یک تحول اساسی، زمینه را برای بکارگرفتن میکروارگانیسم ها در تولید آنتی‌بیوتیک ها، هورمونها، ویتامینها، داروها و غیره فراهم ساخت. همگام با توسعه آنتی بیوتیک های جدید، تولید اسیدهای آمینه و نوکلئوتیدها نیز با موفقیت به انجام رسید. از زمانی که کشف گردیده بعضی از واکنشهای شیمیایی مشکل در ساخت استروئیدها، می توانند توسط میکروارگانیسم ها با راندمان بالایی انجام شوند، تولید آسان هورمونهای استروئیدی مهم در پزشکی امکان پذیر شد. علاوه بر این تعداد زیادی از فرآیندهای تولید آنزیم برای مصارف صنعتی، تجزیه ای، پزشکی نیز توسعه یافتند. مرحله برجسته‌تر پیشرفت بیوتکنولوژی، زمانی روی داد که فرایندهای تخمیری مداوم تکمیل شدند. این فرایندها اولین بار به منظور تولید غذای انسان و خوراک دام از باکتریها و مخمرها (پروتئین تک یاخته) استفاده شدند. [۱۴]

شبیه سازی دام، تولید حیوانات ترا ریخته برای بهبود کیفیت و کمیت تولید، تولید آنزیمها، در عرصه محیط زیست، کاهش مصرف سموم شیمیایی، فروشویی معادن با استفاده از ریزساز واره ها، حتی احیای موجودات منقرض شده از جمله دستاوردهای غیر قابل انکار این فناوری هستند. [۱۰] همچنین برای تولید سوختهای بیولوژی و پاکسازی آلودگی ها و پسماندها از آن استفاده می شود. [ ۱۰] امروزه به لحاظ خطر کمیاب شدن نفت، تولید اتانول سوختی به کمک مواد نشاسته ای شروع شده است، و فرآیندهای میکروبی قدیمی برای ساخت استون و بوتانول از نشاسته ( در دهه ۱۹۲۰ و ۱۹۳۰ توسعه یافته اند) رونق تازه یافته است. برای تولید میکروبی سوخت ها از مواد زائد سلولزی، پتانسیل زیادی وجود دارد اما تا به امروز، این قبیل فرآیندها، هنوز در مرحله آزمایشگاهی خود باقی مانده اند. [۱۴]

داروهایی که از طریق بیوتکنولوژی تهیه می شوند به مراتب کمتر از داروهایی که از طریق شیمیایی سنتز می‌شوند دارای اثرات زیانبار جانبی هستند همچنین بیوتکنولوژی قادر به ساخت داروهای پیچیده ای است که بطریق دیگر نمی‌توان آنها را تولید کرد. بیوتکنولوژی به ویژه با استفاده از روشهای  DNA  نوترکیب، نقش مهمی در تولید داروها و واکسن ها ایفا کرده است. [۱۰]

داروی دسفرال از جمله داروهایی است که از طریق بیوتکنولوژی تهیه می شود. هم اکنون تولید صنعتی دسفری اکسامین  بوسیله تخمیر سویه ای جهش یافته از استرپتومایسس پیلوسوس توسط شرکت نواریتس انجام می شود. بطوری که نمک متان سولفونات دسفری اکسامینB (فرم مزتیله دسفری اکسامین B) با نام تجاری دسفرال جهت درمان بیماران تالاسمی استفاده می گردد. [ ۱۲۸]

ما امیدواریم به یاری خداوند متعال و استعانت از کتاب الهی ( قرآن کریم) و سعی و تلاش محققین کشورمان، به پیشرفت های گسترده تری در این زمینه دست یابیم و کشور عزیزمان در کلیه زمینه های علمی و فرهنگی به بالاترین پیشرفت‌ها نایل آید. و با تولید این دارو، بتوان خدمتی به بیماران  تالاسمی کشورمان که از این بیماری رنج می برند، نمود.

 

 

 

 

 

کاربردهای اکنون و آینده بیوتکنولوژی [۱۰]

 

 

 

 

 

 

 

فصل اول

 

۱-۱ – تالاسمی

بیماری تالاسمی یک بیماری وراثتی است تالاسمی یکی از شایعترین اختلالهای خونی است که بصورت ژنتیکی از نسلی به نسل دیگر منتقل می شود. [۱۲] این بیماری اولین بار در سال ۱۹۲۵ میلادی توسط کولی و همکارانش در شمال آمریکا در پنج کودک با علائم خونی شدید، بزرگی کبد و طحال[۱] وجود رنگدانه در پوست و تغییرات استخوان گزارش شده است که تحت عنوان cooly’s anaemia  نامیده شد. بعدها چون این بیماری در نواحی مدیترانه بیشتر دیده شد واژه یونانی تالاسمی[۲]  برای ایندسته از ناهنجاریها بکار برده شد. تالاسمی یک واژه یونانی و مرکب از دو واژه تالاسا به معنی دریا و امیا به معنی خون است. [۳۸،۳۶،۳۵،۱۲]

بیماری تالاسمی در سرتاسر جهان و در همه نژادها دیده می شودولی شیوع آن در نواحی مدیترانه( ایتالیا، یونان، قبرس و جزیره سیسیل)، خاورمیانه (ایران، ترکیه، سوریه)، آسیا ( هندوستان، پاکستان) و ناحیه جنوب شرقی بیشتربوده و از جنوب غربی اروپا تا خاور دور امتداد یافته و در نواحی وسیعی از آمریکای مرکزی نیز دیده می شود. دلیل این توزیع، بیماری مالاریا بوده که به شکل بومی و برای قرون متمادی در این نواحی شیوع داشته است. انگل مالاریا از راه نیش پشه آنوفل وارد خون شده و در داخل گلبولهای قرمز خون تکثیر می یابد. این انگل در گلبولهای قرمز ناقلین ژن تالاسمی عمر کوتاه تری دارند، نمی تواند به رشد و تکثیر خود ادامه دهد، در نتیجه بیماری متوقف می شود و بیمار از مالاریا نجات خواهد یافت. بنابراین مالاریا در افراد سالم، بیش از  افراد سالم ناقل( مینور) می باشد و در نتیجه مرگ و میر آنها بیشتر است بنابراین افرادی که هموگلوبین طبیعی و یک ژن تالاسمی داشته اند( افراد سالم ناقل) در مقابل بیماری مالاریا مقاومت کرده و ژن تالاسمی را به نسل بعد منتقل کرده اند. شیوع این بیماری در ایران، در تمامی مناطق دیده می شود اما در نواحی حاشیه دریای خزر (استان های گیلان، مازندران، گلستان) و نواحی حاشیه خلیج فارس(بوشهر،هرمزگان، سیستان و بلوچستان، خوزستان، فارس، جنوب کرمان) شیوع بیشتری دارد.[۱۲]

 

۱-۲-اتیولوژی و سبب شناسی تالاسمی

تالاسمی نوعی اختلال در امر خون سازی است. [ ۱۲] اکنون پیرامون علت بیماری تالاسمی و ارتباط آن با خون سازی بحث خواهیم کرد.

 

 

۱-۲-۱ – خون شناسی

اعضاء بافتهایی که سلول خونی را تولید می کنند بافتهای خون ساز نامیده می شوند. در دوران جنینی خون سازی در کبد و طحال و مغز استخوان انجام می شود. با افزایش سن خون سازی فقط در استخوان های پهن و مرکزی بدن، مانند مهره ها،جناغ، دنده ها و لگن انجام می شود.[۱۲] خون شامل دو بخش می باشد که عبارتند از:

الف) پلاسما:

مایع زرد رنگ و روشن که شامل آب و بسیاری از یون ها و مولکولهای کوچک و بزرگ مانند املاح و مواد پروتئینی، قندهاوچربی ها است.

ب) سلولهای خونی:

سلولهای خونی عبارتند از: گلبولهای سفید، پلاکت ها و گلبولهای قرمز که به شرح هر یک از آنها می پردازیم.

گلبولهای سفید: بدن را در مقابل عفونتها و بیماریها حفظ می کند.

پلاکت ها: کار اصلی پلاکت ها متوقف کردن خروج خون از بدن در هنگام مجروح شدن است.

گلبولهای قرمز: گلبولهای قرمز به شکل دیسک(صفحه) های معقرالطرفین هستند که هنگام عبور از مویرگها قابلیت تغییر شکل دارند.

گلبول قرمز دارای مولکولی به نام هموگلوبین است که اکسیژن را از ریه به بافت ها حمل می کند.

هموگلوبین از دو بخش «هم» و گلوبین تشکیل شده است گلوبین شامل چهار زنجیره است که بطور معمولی دو به دو با یکدیگر جفت هستند. در انسان چهار نوع زنجیره آلفا، بتا، دلتا، گاما وجود دارد.

هموگلوبینA :شامل دو زنجیره آلفا و دو زنجیره بتاست. (زنجیره آلفا، ۱۴۱و زنجیره بتا۱۴۶ اسید آمینه دارد.

هموگلوبینA2 : شامل دو زنجیره آلفا و دو زنجیره دلتا است.

هموگلوبینF: شامل دو زنجیره آلفا و دو زنجیره گاما است.

هموگلوبینF در دوران جنینی ساخته می شود و پس از تولد هموگلوبینF به تدریج کم شده به میزان هموگلوبینA افزوده می شود و در دوران بلوغ بیشترین مقدار هموگلوبینHb  از نوعA است و علاوه بر این از دوران جنینی تولید Hb    هم شروع شده و همواره به طور طبیعی به میزان کمی سنتز می شود و مقدار طبیعی آن معمولاً %۵/۲ – % ۵/۱ است.

در بیماری تالاسمی نقص در ژن مسئول ساختن یکی از زنجیره های هموگلوبین وجود دارد که یا کم ساخته می شود و یا اصلاً ساخته نمی شود. [۱۲،۶و۷]

 

۱-۲-۲- خون سازی و گلبولهای قرمز

سلول اولیه قرمز خون در مغز استخوان ساخته می شود که اریترون [۳] نام دارد. اجداد سلولهای قرمز از سلول stem  که خود توانایی ایجاد سلولهای دیگر را دارد، ساخته می شود. کل زمانی که لازم است، تکامل انجام شود و سلولها، قابل تفکیک از یکدیگر باشند ۷ روز است. چهار روز اول در تقسیم سلولی سپری می شود که در این زمان از دو سلول دختر، ۱۶ سلول پیشتاز اولیه سلولهای قرمز بوجود می آید. ۳ روز بقیه مربوط به تکامل و سنتز هموگلوبین است. در این زمان بتدریج هسته از بین می رود. زمانی که هسته سلول در حال از بین رفتن است و مرحله ماقبل بلوغ کامل سلول قرمز است، هسته سلول به صورت شبکه در می آید و در این مرحله به نام رتیکولوسیت موسوم است که ۴۸-۲۴ ساعت دراین وضعیت در مغز استخوان باقی می ماند و سپس به سمت گردش خون حرکت کرده و در خون محیطی پس از یک روز،  بقایای هسته خود را از دست داده به گلبول قرمز تبدیل می شود.[۶]

 

۱-۳- تالاسمی و انواع آن

همانطور که گفته شد تالاسمی ها گروه گوناگونی از آنمی های میکروسیتیک، هیپوکروم، همولیتیک هستند که در اثر نقص سنتزیک یا چند زنجیره گلوبین بوجود می آیند. که به موجب نقص در سنتز آلفا گلوبین و کاهش سنتز بتا گلوبین به دو گروه زیر تقسیم می شوند: [۴۰،۳۷،۳۶،۳۵].

الف) آلفا تالاسمی

ب) بتا تالاسمی

که به شرح هر یک از آنها می پردازیم.

۱-۳-۱ آلفا تالاسمی

آلفا تالاسمی در اثر نقص تولید زنجیره آلفا گلوبین می باشد. از آنجاییکه موتاسیون می تواند یک یا هردو ژن را تحت تأثیر قرار دهد شخص می تواند یکی از چهار حالت آلفا تالاسمی را داشته باشد.

۱-      silent  carrier (-α×αα)  ( سه ژن فعال) : غالباً فنوتیپ silent carrier      برای متمایز کردن از حالت عادی مشکل است و از MCV وMCH    برای شناسایی استفاده می شود.

تالاسمی ارثی (–×αα یا -α×-α ) ( دو ژن فعال) : تالاسمی ارثی از نظر کلینیکی اغلب نرمال است. بعضی اشخاص با آلفا تالاسمی ارثی مخصوصاً بچه ها ممکن است یک آنمی خفیف میکروسپتیک داشته باشند که به اشتباه به آنمی فقر آهن تشخیص داده می شود که باید دقت شود.

۳- هموگلوبین H (–×-α) ( یک ژن فعال): بیماری هموگلوبین شدت متوسطی دارد. حالت همولیتیک بواسطه خستگی و ناراحتی عمومی و اسپلنومگالی مشخص می شود. این بیماران بندرت به بیمارستان احتیاج دارند و از یک زندگی نسبتاً عادی برخوردارند

۴ – Barts Hydrops  یا   تالاسمی: آلفا تالاسمی معمولاً با زندگی بعد از تولد سازگاری ندارد. اصولاً نوزادان مبتلا زنده به دنیا نمی آیندیا اگر زنده متولد شوند بعد از مدت کوتاهی از شدت ادم [۴] خواهند مرد. یک تعداد کمی از نوزادان مبتلا بوسیله تکرار ترانسفوزیون داخل رحمی از میانه آبستنی درمان می شوند و تا اوایل طفولیت زنده می مانند. اخیراً تشخیص پیش ازتولد آلفا تالاسمی با استفاده از تکنیک۲PCR  ممکن شده است.

اگر ژن بتا تالاسمی تکثیر یابد ولی ژن آلفا تکثیر پیدا نکند، تشخیص آلفا تالاسمی است[۷۵،۷۰،۳۵]

 

۱-۳-۲- بتا تالاسمی

بتا تالاسمی بر اثر کاهش سنتز زنجیره های بتا گلوبین بوجود می آید. از نظر فنوتیپی و بالینی سه شکل مینور، ماژور، بینابینی (اینترمدیا) وجود دارند.[۱۲]

 

۱-۳-۲-۱ بتا تالاسمی مینور(سالم ناقل)

زندگی فرد بتا تالاسمی مینور عادی است و می تواند به فعالیتهای معمولی روزانه بپردازد. تنها نکته که لازم است این افراد رعایت کنند و بسیار مهم است توجه به این مسئله در زمان ازدواج است که باید آزمایش‌های زمان ازدواج را با دقت انجام دهند. هتروزیگوتهای بتا تالاسمیک [افراد ناقل) معمولاً فقط کمی آنمیک بوده و علائم کلینیکی چندانی ندارند.[۱۲]

 

 

۱-۳-۲-۲ بتا تالاسمی ماژور( بیماری تالاسمی)

بیماری بتا تالاسمی ماژوراختلال سنتز هموگلوبین است و فرد مبتلا دچار کم خونی خیلی شدیدی است. این بیماری در چند ماه اول نشانه های بارزی ندارد و از حدود شش ماهگی نشانه های بیماری شروع می‌شود. گلبول قرمز این بیماران هم از لحاظ شکل ظاهری متغیر است و هم طول عمر کوتاهی دارد. این بیماری از طریق والدین به جنین منتقل شده و اثری روی آن ندارد؛ زیرا جنین نوعی هموگلوبین مخصوص به خود به نام هموگلوبین جنینی ( HbF) دارد که با هموگلوبین بزرگسالان (  HbA) متفاوت است.

هنگامی که نوزاد متولد می شود، بیشتر هموگلوبین او جنینی است اما طی شش ماه اول زندگی، هموگلوبین جنینی جای خود را به هموگلوبین بزرگسالان می دهد.

مشکل بیماران مبتلا به بتا تالاسمی ماژور این است که قادر به ساختن هموگلوبین بزرگسالان به اندازه کافی نیستند و در واقع هموگلوبین نوع جنینی (F) به نوع طبیعی بزرگسالان ( A ) تبدیل نمی شود.

علائم این بیماری بصورت کم خونی متوسط یا شدید، زردی (ایکتر) خفیف، اختلال رشد، بزرگی کبد(هپاتومگالی) و بزرگی طحال( اسپلنومگالی) ظاهر می گردد. بعبارتی این افراد بتدریج پیگمانته شده و دچار هپاتواسپلنومگالی، همچنین اختلالات غدد درون ریز مخصوصاً غدد فوق کلیه و پاراتیروئید می شوند.

با افزایش سن و طولانی شدن مدت کم خونی، فعالیت مغز استخوان شدید می شود و به این دلیل استخوانهای پهن جمجمه و صورت تغییر شکل داده و زیگوماتها بیرون زده می شود همچنین چشمها دور از هم قرار می گیرند و چهره خاصی به بیمار می دهد. از طرف دیگر، به علت افزایش آهن سرم (خون) بیمار دچار رسوب آهن در بافتهای نرم می شودکه موجب عوارضی مانند بزرگ شدن قلب و نارسایی آن، اختلال رشد، اختلال در بروز علائم جنسی ثانویه و اختلال در عملکرد غدد داخلی مانند لوزالمعده و در نتیجه بروز بیماری دیابت می شود. همچنین به دلیل پوکی استخوان ممکن است این افراد دچار شکستگی و پوکی استخوان شوند. اختلالات هیپرمتابولیک، همراه با بالارفتن متابولیسم پایه و تب و کاهش وزن شده  و از آنجایی که احتیاجشان به فولات بالا می رود، شاید دچار فقر فولات  و آنمی مگا لوبلاستیک هم بشوند. پس رساندن اسید فولیک لازم است.

با تزریق داروی دفع کننده آهن می توان از این عوارض جلوگیری کرد.[۱۲،۵،۶،۸]

 

۱-۳-۲-۳-بتا تالاسمی بینابینی:

انواعی از بتا تالاسمی ها وجود دارند که از نظر شدت ما بین انواع هموزیگوت و هتروزیگوت بوده و اصطلاحاً بتا تالاسمی بینابینی یا اینترمدیا گویند. [۱۲،۶،۳۹]

 

۱-۴- تشخیص تالاسمی

شمارش گلبولی(CBC)[5] می تواند اطلاعات مفیدی در مورد بیماری به ما بدهد چون در بسیاری از بیماریها چه بصورت وراثتی و چه بصورت اکتسابی اندیس های خون تغییر می کند. بنابراین تشخیص تالاسمی از روی شکل ظاهری گلبولهای قرمز و اندازه گیری میزان و نوع هموگلوبین انجام می شود. در افراد مینور گلبولهای قرمز کوچک تر از حد معمول بوده، بنابراینMCV  [6] پایین تر از حد طبیعی (هشتاد فیمتولیتر) و  MCH<27 [7]  دارند. همچنین میزان    HbA2  در این افراد بیش از % ۵/۳ خواهد بود. در بیماری تالاسمی ماژور علاوه بر تغییر شکل گلبولهای قرمز و کم خونی شدید(هموگلوبین پایین)، میزان هموگلوبینA به شدت کاهش و در عوض میزان هموگلوبینF افزایش می یابد.

 

۱-۵- درمان تالاسمی

درمان این بیماری به دو شکل زیر امکان پذیر است:

الف) پیوند مغز استخوان

در حال حاضر تنها راه درمان قطعی بیماران مغز استخوان است که در شرایط خاصی قابل انجام است از جمله اینکه فرد بیمار خواهر یا برادری داشته باشد که از نظر  HLA  با وی سازگاری لازم را داشته باشد. علاوه بر هزینه ای زیاد پیوند مغز استخوان، مخاطرات عمل پیوند و عوارض آن زیاد است و احتمال بازگشت بیماری با عوارض بیشتر وجود دارد.[۱۲]

ب) درمان کمکی

به دلیل ورود آهن مازاد به بدن در طی تزریق خون و طی مراحل بیماری و عدم توانایی بدن برای دفع آن لازم است داروی دفع کننده آهن بصورت روزانه تزریق شود تا از رسوب آهن اضافی در بدن مانند قلب، کبد، لوزالمعده و غدد مترشحه داخل کاسته شود. برای جلوگیری از تجمع آهن از آمپولهای دسفرال که بصورت دائم توسط پمپ مخصوصی از



[۱] Hepatosplenomegaly 

[۲] -Thalassaemia

[۳] Erythron

[۴] Hydrops  fetalis

[۵] Cell  blood  counting

[۶] Mean  corpuscular  volumel

[۷] – Mean carpuscular hemoglobin

…………………….

 

 

 

………………………………………..

 

 

 

 

 

 

 

 

۵ ـ ٣ـ ١ـ تهیه محیط ذخیره

از هر یک از محیطهایMYB  وN.B   وLBوISP2 تهیه کرده و به میزانml ۵٠ از هر یک در ارلنهای ml٢۵٠ ریخته شد (به منظور هوادهی مناسب، نسبت ١ به ۵ هوادهی، رعایت شد) و اتوکلاو گردید و سپسml ۵/٠ از سوسپانسیون استوک داخل هر یک از ارلنهای محتوی محیطهای کشت ذکر شده بوسیله سرنگ استریل ریخته شد و سپس محیطهای مذکور به مدت ۴٨ ساعت و در دمایc ٢٩ْ با دور rpm١۵٠ در شیکر انکوباتور قرار داده شدند سپس محیطهای مورد نظر از شیکر خارج گردید و % ٢٠ـ % ١۵ گلیسرول استریل به منظور محافظت در برابر سرما به محیطها افزوده شد و پس از آنکه به خوبی مخلوط شد داخل ویالهای دردار استریل توزیع گردید و در آنها محکم بسته شد و درc ٢٠ْ-  نگهداری شدند از محیطهای ذخیره حاصل پس از خارج کردن از فریزر و رسیدن دمای آنها به دمای محیط آزمایشگاه در آزمایشهای  بعدی استفاده گردید.

 

۵ ـ ٣ـ ٢ـ تهیه سوسپانسیون اسپور

محیط کشتMYA تهیه شد و سپس اتوکلاو گردید و داخل پلیت واسلنت ریخته شد. پس از تلقیح سوسپانسیون استرپتومایسس پیلوسوس با سرنگ استریل، سطح آن کاملاً و بطور گسترده از باکتری کشت داده شد و به مدت ١٠ روز در دمایc ٢٩ْ انکوبه شدند تا سطح آنها کاملاً از اسپور پوشیده شود کلنیهای حاصل به دلیل تراکم بیش از اندازه منابع غذایی همدیگر را محدود می کردند و بسیار سریع وارد فاز اسپوردهی می شوند و به این ترتیب مقدار زیادی اسپور بدست می آید . سپس جهت سوسپانسیون اسپور حدود ml٣ سرم فیزیولوژی استریل به داخل لوله اسلنت و یا در……………………….

بلافاصله بعد از پرداخت موفق میتوانید فایل کامل این پروژه را با سرعت و امنیت دانلود کنید

قیمت اختصاصی و استثنایی این پروژه در پایان نامه دات کام : تنها , ۵۵۰۰ تومان

 

 

 

نقد وبررسی

نقد بررسی یافت نشد...

اولین نفر باشید که نقد و بررسی ارسال میکنید... “ارزیابی میزان تولید داروی دسفرال از سویه استرپتومایسس پیلوسوس به روش بیولوژیک”

ارزیابی میزان تولید داروی دسفرال از سویه استرپتومایسس پیلوسوس به روش بیولوژیک

0 نقد و بررسی
وضعیت کالا : موجود است.
شناسه محصول : 1118

قیمت : تومان5,500